如何判定PCR儀的好賴?
(一)、溫度準確性
溫度準確性是PCR儀重要的性能指標,如溫度準確性低可直接造成非特異性擴增,甚至是錯誤的擴增結果,造成假陽性和假陰性。
市場上各家廠商考核基因擴增儀(PCR儀)性能的主要指標,一般廠家的企業指標為±0.5℃,一些性能較好的產品可以實現的溫度準確度為±0.3℃。故需對PCR儀控溫準確度進行測試。校準實驗平均溫度的計算公式為:I—參加檢測的溫度探頭序號;n—參加檢測的溫度探頭的數量
(二)、溫場均勻性
由于PCR儀加熱器加熱不均勻,導致PCR儀模塊上各孔存在一定溫差。造成試驗結果偏差。一般PCR儀邊緣點的溫度低于中間區域,所以均勻性為PCR儀重要的性能指標。一般廠家的企業指標規定均勻性為±0.5℃,一些性能較好的產品可以實現的溫度均勻度為±0.3℃。校準實驗時,通過選取孔板中16個特殊反應位置來測量溫度,并得出孔板的溫度均勻性。均勻性為各個探頭在同一時刻max溫度與min 溫度的差值。均勻度計算公式為:tmax-tmin
(三)、升降溫速率
PCR擴增產物數量的決定了PCR的效率。為了在短時間內獲得盡可能多的產物,需要儀器在升降溫段具有按照預設升降溫速率快速升溫和降溫的能力(max-升溫速率達15~20℃)。一個完整的PCR過程,是由若干個升溫→恒溫→降溫循環構成的。因為“變性”,“退火”和“延伸”3個階段是必須要***的。因此,只有使升降溫的過程盡可能地迅速,才能縮短每個PCR循環以及整個PCR 過程所需時間。一般廠家的企業指標規定升溫速率為±3℃/sec。
儀器校準實驗時,升溫速率為溫度從40℃到90℃的時間;降溫速率為溫度從70℃到35℃的時間。
(四)、max-調溫度
當溫度從一高溫度調節到另一低溫度,就會產生溫度的調。調溫度過大同樣會對試驗產生影響,所以校準實驗時,需要計算max-調溫度和平均調溫度。
PCR儀溫度驗證系統 PCR儀溫度系統
性能特點:
96孔探頭配置:96孔測溫探頭板配置15個溫度探頭,支持熱蓋測溫,適用96孔PCR設備,探頭板厚度不2mm;
44孔探頭配置:采用組合式測溫探頭,3組16孔溫度探頭板,每個探頭板6個測溫探頭,可自由組合,探頭板厚度不2mm,且都支持熱蓋測溫,適用44孔PCR設備,可適配博日QuantGene系列、宏石Slan96/48、可適配安譽4800/9600等型號PCR儀;
1/2/3/4/6/7/8孔探頭配置:4個單個無線測溫探頭;
測溫范圍:0-120℃,溫度的分辨率0.01℃,精度優于±0.1℃;
96孔探頭同時支持無線和有線數據實時傳輸。無線模式下 ,采用ZigBee無線通訊,傳輸距離不少于30米;有線模式下,數據線可插拔,同時支持下側和右側出線;
組合式測溫探頭的單個測溫板可獨立無線實時數據傳輸,可通過ZigBee通訊無線組網,且支持多個測溫板組合同時對同一臺或幾臺被測儀器測試;
單個無線測溫探頭可獨立無線實時數據傳輸,可通過ZigBee通訊無線組網,長寬不過18*15mm,以滿足國內外不同型號熒光PCR設備內部空間的限制性要求,可適配安譽DA7600、AGS8830-8等設備。
所有探頭內置電池,不需要插電工作,連續工作時長不低于200小時;
數據收集速度支持每秒1-5次可調,以準確反應PCR反應升降溫速度;
支持離線數據收集和數據導出,存儲量不少于30000組;
支持實時查看無線設備的信號強度和電池電量信息;
支持采集到的所有原始溫度數據導出為Excel格式文件,以便對測試結果進一步分析;
支持中文操作界面,支持2D/3D溫場熱成像圖實時播放及回放;
能自動輸出包含不確定度,至大至小過沖等參數,且符合JJF 1527-2015的校準報告;
PCR儀溫度驗證系統 PCR儀溫度系統

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